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2020年了解PCR实验室建设,阻止新冠病毒肆虐

文章作者:admin 发布时间:2020-11-26 18:01:32 浏览次数:0
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  一起来了解下PCR实验室建设,进一步加强对新冠病毒检测的防控认识,打赢防疫保卫战。

  就新冠病毒核酸检测来说,RT-PCR是目前使用广泛和较准确的筛选和确认方法。就是通过扩增新冠病毒RNA,通过荧光探针实时检测扩增产物,这种方法很灵敏,也能够很好地定量。从目前来看,很多核酸检测试剂盒的准确率都不错,而检测反应的准确程度取决于公布的基因序列的准确程度,以及PCR过程中引物、探针等的设计。当然,也可用测序方法更准确的检测新型冠状病毒,但是这对仪器要求高,速度也慢,不适合大批量筛查,所以说主流的检测方法仍是实时荧光定量法。那在新冠病毒肆虐后,必然会引起相关机构单位着力建设规范的临床PCR实验室。

  标准的PCR实验室可分成4个区域,按操作流程包括:

  核酸扩增区:提取纯化的核酸上机扩增。

  试剂制备区:扩增试剂的配制、分装、保存。

  产物分析区:扩增产物结果分析,生成报告。

  样本前处理区:样本分装,核酸提取、保存。

  建设标准的临床PCR实验室,要避免检测实验中出现错检、漏检,保证检测结果的准确性,就要做到以下几点:

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  一、 可靠的实验仪器与试剂:

  (1)相关仪器

  (2)相关试剂:新冠病毒核酸检测试剂或试剂盒、病毒核酸提取试剂或试剂盒、RT-PCR扩增试剂。

  (3)相关耗材:检测中仪器配套耗材、人体安全防护工具、有效消毒液等。

  二、 严格的实验操作流程:

  1、临床PCR实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训合格后才能从事临床基因扩增检验的工作; 在实验操作过程中,操作者必须戴手套、帽子,并经常更换,必要时需穿防护服、戴护目镜等防护工具。清洁工作及时、正确。实验工作结束后,必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行擦拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。

  2、严格控制进出实验室的人员,与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门。在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服,当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域; 尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等; 扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。

  三、安全的PCR实验室建设:

  1、普通PCR实验室通常设置四个工作区,即试剂制备区、样本制备区、核酸扩增区、产物分析区。符合要求的临床PCR实验室在试剂准备区、样本制备区、产物分析区等三个或四个区域在物理空间上必须是完全独立的,始终处于完全分离的状态,不能有空气直接相通。在可能出现污染的区域安装排风扇,使气流按照试剂准备区→样本制备区→扩增及产物分析区流动。

  2、随着核酸检测方法的优化和实验仪器的功能强化,PCR实验走向了自动化和高通量,这大大降低了病毒检测的时间、提高了检测的效率,也改变了普通PCR实验室建设的平面布局。如全自动定量PCR实验室可设置为试剂制备区、样本处理区、核酸扩增和产物分析区,后两个区合并(用于新冠病毒检测的PCR实验室)。一体化自动化PCR实验室设试剂制备和自动检测区,后三个区合并。

  NO.1建设要点:

  ① 气流走向:试剂制备区和样本处理区宜微正压,可以防止外界DNA或RNA包裹的气溶胶进入,造成污染,试验区可通过控制进风量大于排风量达到正压效果。

  核酸扩增区和产物分析区宜微负压,可以防止含核酸的气溶胶扩散出去造成污染,试验区可通过控制进风量小于排风量达到负压效果。

  PCR实验室整个区域应建立一个整体缓冲走廊,每个独立操作区在入口处设置有缓冲区,减少室内外空气交换,同时各区可通过气压调节,建缓冲区比专用走廊在减少气体交换上更有意义。在实验区安装风速可调的回风口,空气通过回风口换气,使实验过程中试剂和样本免受气溶胶微粒的污染同时降低扩增产物对实验人员和环境的污染风险。

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  ② 消毒:在各个实验区和缓冲区顶部及传递窗内部安装紫外灯,用于实验环境消毒。

  ③ 传递窗:试剂和样本在各个实验区之间通过机械连锁的不锈钢传递窗传递,保证样本和试剂在传递过程中不受污染。

  ④ 生物安全:按照新型冠状病毒实验室生物安全指南规定,该病原体暂按照病原微生物危害程度分类中第二类病原微生物进行管理,核酸提取应当在生物安全二级实验室进行,同时采用生物安全三级实验室的个人防护,并在生物安全柜(最好是B2型的,可避免提取的核酸在柜内反复循环,造成标本间交叉“污染”,出现假阳性结果)中操作。

  NO.2实验区应控制:

  1、绝对负压(防止室内潜在污染物外泄);

  2、定向气流(气流从低污染区流向高污染区);

  3、无害外排(外排气流经高效过滤器过滤并做高空排放)


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