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PCR实验室建设应该分区吗?分区后能够杜绝污染的发生吗?

文章作者:admin 发布时间:2020-09-23 16:09:24 浏览次数:0
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  目前,PCR实验室建设至少应分为三个区域,即试剂制备区、核酸制备区和聚合酶链反应扩增区。如果开放鉴定扩增产物,如杂交和电泳,原则上应加第四区。实验室分区的主要目的是避免纯化核酸和扩增产物对前一区域的反向污染。但是,多年的经验表明,无论是设立三区还是四区,实验室污染似乎都没有完全消除。反而罗氏COBAS“一体机”引入实验室后,乙肝20IU/ML的敏感性能够长期保持良好,很少有系统污染的发生,实验室分区的意义受到一定程度的质疑!

pcr实验室建设

  仔细对比后不难发现,罗氏的Cobas无法避免样品的交叉污染,因为这个环节是实验室工作人员完成的,这是管理问题而不是检测问题;COBAS在核酸制备过程中,经常发生核酸纯化的Tip头吹出气泡和气泡破裂的情况,虽然这种情况并不常见,但核酸纯化和试剂分配共用一个空间是事实,有研究报道,COBAS检测28个样本,有2个污染(JCM, 2011,P2854-2858),我们也从21个阴性样本中发现一个污染,COBAS的污染就像普通实验室一样存在,但令人惊奇的是,从未像普通实验室那样发生系统性污染,但有一点可以说明,气溶胶或许并不是实验室污染的主要原因。

  分析我国大多PCR实验室建设项目不难发现,接近百分之80的实验室采用荧光PCR试剂盒进行临床检测,即这部分实验室不存在开放性核酸鉴定环节,试剂工作液的配制多在核酸制备完成后进行,依存“试剂配置与PCR扩增之间的时间越短越好”的原则,多数实验室的试剂配制均在核酸制备室完成,也就是说,试剂配制室的存在基本被忽视,了解了罗氏COBAS的操作方式,这种做法便显得无可厚非!

PCR实验室建设

  以罗氏的Cobas为镜,PCR实验室建设是否分区并不重要!但这并不是说PCR实验室不需要分区,因为仪器自动控制的机械臂与实验室操作人员的操作习惯和规则的执行有本质的不同!这可能是严格分区后实验室也存在污染的主要原因吧!


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